practica #3 "Streptococcus"

Para esta practica vamos a utilizar otra vez el material de tinción de Gram

Cuestionario para el reporte de la practica #2

1.- ¿Cuál es la composición química de la enzima Catalasa?
2.- Dentro de los cocos Gram positivos, de ¿cuál género se puede diferenciar los Staphylococccus con la prueba de catalasa?
3.- ¿Con cuál prueba bioquimica se puede diferenciar el género Micrococcus del género Staphylococcus y en qué radica dicha explicación?
4.- ¿Cómo es el modo de acción de la Coagulasa?
5.- ¿Cómo actuan las coagulasas ligada y libre? En el laboratorio, ¿Cómo se pueden distinguir o practicar?
6.-¿Cuál es la función de cada uno de los ingredientes del medio de Agar Sal y Manitol?

Práctica "Staphylococccus"

Los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios facultativos que están constituidos por la familia Micrococacceae (géneros Staphylococcus, Micrococcus, Planococcus y Stomacoccus) y los

géneros Streptococcus y Enterococcus.

GENERO STAPHYLOCOCCUS

IDENTIFICACION

El primer paso para la identificación de una especie bacteriana es el estudio de su morfología microscópica y macroscópica. Luego se deben estudiar sus requerimientos atmosféricos y nutricionales. Por último se procede a la realización de pruebas bioquímicas que permitirán llegar a la identificación de género y especie bacteriana.

Morfología microscópica

Para la misma se debe realizar un frotis, de preferencia a partir de medio líquido, realizando luego la tinción de Gram lo que nos permitirá apreciar la forma, agrupación y comportamiento al Gram de la cepa en estudio. El género Staphylococcus se caracteriza por ser cocos Gram positivos que se agrupan en forma de racimo.

Morfología macroscópica

Existe morfología macroscópica en medio líquido y en medio sólido. En medio líquido debemos observar la turbidez que se desarrolla luego de incubar 18-24 horas. En medio sólido debemos contar con un aislamiento de la cepa a estudiar en una placa de Petri. El aislamiento nos permitirá observar las características de las colonias, que son las estructuras macroscópicas que forman las bacterias cuando crecen en medios sólidos.

Requerimientos atmosféricos

El género Staphylococcus es aerobio-anaerobio facultativo, por tanto su crecimiento en tioglicolato será

en toda la extensión del tubo.

Requerimientos nutricionales

El género Staphylococcus es no exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales, por lo tanto crece en medios de cultivo pobres.

ENSAYOS BIOQUIMICOS

Las pruebas o ensayos bioquímicos son aquellas que ponen en evidencia la existencia de una enzima o pasos metabólicos determinados. Ahora enumeraremos las pruebas bioquímicas necesarias para la identificación de los estafilococos.

1. PRUEBA DE LA CATALASA

Objetivo: Separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa -).

Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.

Interpretación de resultados: El desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva. Dentro de la Flia. Micrococacceae existen 4 géneros, el de mayor importancia clínica es el Género

Staphylococcus.

Dentro del G.Staphylococcus existen 3 especies de importancia clínica: S.aureus, S.saprophyticus y

S.epidermidis.

2. PRUEBA DE LA COAGULASA

Objetivo: Permite separar S.aureus, que posee coagulasa, de las otras especies de estafilococos que

genéricamente se denominan coagulasa negativos.

Fundamento: S.aureus posee dos tipos de coagulasa:

a. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la pared celular. Esta

actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación de coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado (test en lámina).

b. Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor (CRF), formándose

un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

3. SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

Objetivo: Separar S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa

negativos.

Fundamento: Varias especies del Género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina (disco

de 5 ìg).

Procedimiento: Se siembra una placa de agar sangre con un hisopo embebido en una suspensión de la cepa a estudiar. Luego se aplica el disco de novobiocina y se incuba a 35º por 18 horas.

Interpretación de resultados: Un halo de inhibición de crecimiento menor o igual a 16mm corresponde a S.saprophyticus. Un halo de inhibición mayor de 16mm corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.

practica #2 "ESTAFILOCOCOS"

La práctica se hará el dia miercoles 14 de mayo.
Las técnicas van a ser prueba de catalasa, coagulasa, novobiocina; para que lean acerca de lo que vamos a realizar.

Sección: 05 Evaluación

50 % - Examen
30 % - Reporte
10 % - Bitacora(Asistencia)
10 % - Tareas

PRACTICA #11 "PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA" (Antibiograma)

• En esta práctica vamos a utilizar pinzas de esas que se ocupan para sacar cejas, una por mesa.
• Método que vamos a utilizar: Kirby Bauer
• Llevar consigo una regla
  

PRACTICA #10 (SEGUNDA PARTE)

Medios semisólidos que vamos a utilizar:

• MIO. M= movilidad, I = Indol, O = Ornitina
• Rojo de Metilo
• Malonato
• Urea

En E.coli, Proteus vulgaris, Shigella sp, Klebsiella

Medios semisólidos.

- Se utilizan para identificaciones bioquímicas y averiguar si el germen estudiado es móvil. Los medios semisólidos tienen una consistencia blanda.

MIO (motilidad, indol, ornitina) podemos observar si el m.o. tiene movilidad (motilidad), La otra prueba que podemos hacer es Ornitina el medio MIO tiene un indicador que si el m.o. puede descarboxilar la ornitina se hara alcalino Coloración azul, de intensidad variable si No descarboxila la Ornitina la coloración permanecera amarilla. Lo siguiente es el Indol que es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de m.o.

La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo del reactivo de Kovacs.

Resumiendo PRESENCIA de un ARO ROJO al añadir el reactivo de Kovacs INDOL POSITIVO el M.O. posee la TRIPTOFANASA.

La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador y el m.o. fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.

El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.

El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.

La urea es una diamida del ácido carbónico que puede ser hidrolizada con liberación de amoníaco y dióxido de carbono.

Caldo: una coloración rojiza indica alcalinazación e hidrólisis de urea

Controles

Positivo: Proteus sp

Negativo: Escherichia coli

Caldo con malonato.

El caldo con malonato se emplea para diferenciar enterobacterias del grupo de Enterobacter de bacterias del grupo de Escherichia; los primeros son capaces de utilizar malonato como única fuente de carbono, produciendo una reacción alcalina y cambio de color del medio al azul. Si no se aprecia viraje de color la reacción es negativa.