Práctica "Staphylococccus"

Los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios facultativos que están constituidos por la familia Micrococacceae (géneros Staphylococcus, Micrococcus, Planococcus y Stomacoccus) y los

géneros Streptococcus y Enterococcus.

GENERO STAPHYLOCOCCUS

IDENTIFICACION

El primer paso para la identificación de una especie bacteriana es el estudio de su morfología microscópica y macroscópica. Luego se deben estudiar sus requerimientos atmosféricos y nutricionales. Por último se procede a la realización de pruebas bioquímicas que permitirán llegar a la identificación de género y especie bacteriana.

Morfología microscópica

Para la misma se debe realizar un frotis, de preferencia a partir de medio líquido, realizando luego la tinción de Gram lo que nos permitirá apreciar la forma, agrupación y comportamiento al Gram de la cepa en estudio. El género Staphylococcus se caracteriza por ser cocos Gram positivos que se agrupan en forma de racimo.

Morfología macroscópica

Existe morfología macroscópica en medio líquido y en medio sólido. En medio líquido debemos observar la turbidez que se desarrolla luego de incubar 18-24 horas. En medio sólido debemos contar con un aislamiento de la cepa a estudiar en una placa de Petri. El aislamiento nos permitirá observar las características de las colonias, que son las estructuras macroscópicas que forman las bacterias cuando crecen en medios sólidos.

Requerimientos atmosféricos

El género Staphylococcus es aerobio-anaerobio facultativo, por tanto su crecimiento en tioglicolato será

en toda la extensión del tubo.

Requerimientos nutricionales

El género Staphylococcus es no exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales, por lo tanto crece en medios de cultivo pobres.

ENSAYOS BIOQUIMICOS

Las pruebas o ensayos bioquímicos son aquellas que ponen en evidencia la existencia de una enzima o pasos metabólicos determinados. Ahora enumeraremos las pruebas bioquímicas necesarias para la identificación de los estafilococos.

1. PRUEBA DE LA CATALASA

Objetivo: Separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa -).

Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.

Interpretación de resultados: El desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva. Dentro de la Flia. Micrococacceae existen 4 géneros, el de mayor importancia clínica es el Género

Staphylococcus.

Dentro del G.Staphylococcus existen 3 especies de importancia clínica: S.aureus, S.saprophyticus y

S.epidermidis.

2. PRUEBA DE LA COAGULASA

Objetivo: Permite separar S.aureus, que posee coagulasa, de las otras especies de estafilococos que

genéricamente se denominan coagulasa negativos.

Fundamento: S.aureus posee dos tipos de coagulasa:

a. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la pared celular. Esta

actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación de coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado (test en lámina).

b. Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor (CRF), formándose

un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

3. SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

Objetivo: Separar S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa

negativos.

Fundamento: Varias especies del Género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina (disco

de 5 ìg).

Procedimiento: Se siembra una placa de agar sangre con un hisopo embebido en una suspensión de la cepa a estudiar. Luego se aplica el disco de novobiocina y se incuba a 35º por 18 horas.

Interpretación de resultados: Un halo de inhibición de crecimiento menor o igual a 16mm corresponde a S.saprophyticus. Un halo de inhibición mayor de 16mm corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.