PRACTICA #10 (SEGUNDA PARTE)

Medios semisólidos que vamos a utilizar:

• MIO. M= movilidad, I = Indol, O = Ornitina
• Rojo de Metilo
• Malonato
• Urea

En E.coli, Proteus vulgaris, Shigella sp, Klebsiella

Medios semisólidos.

- Se utilizan para identificaciones bioquímicas y averiguar si el germen estudiado es móvil. Los medios semisólidos tienen una consistencia blanda.

MIO (motilidad, indol, ornitina) podemos observar si el m.o. tiene movilidad (motilidad), La otra prueba que podemos hacer es Ornitina el medio MIO tiene un indicador que si el m.o. puede descarboxilar la ornitina se hara alcalino Coloración azul, de intensidad variable si No descarboxila la Ornitina la coloración permanecera amarilla. Lo siguiente es el Indol que es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de m.o.

La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo del reactivo de Kovacs.

Resumiendo PRESENCIA de un ARO ROJO al añadir el reactivo de Kovacs INDOL POSITIVO el M.O. posee la TRIPTOFANASA.

La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador y el m.o. fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.

El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.

El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.

La urea es una diamida del ácido carbónico que puede ser hidrolizada con liberación de amoníaco y dióxido de carbono.

Caldo: una coloración rojiza indica alcalinazación e hidrólisis de urea

Controles

Positivo: Proteus sp

Negativo: Escherichia coli

Caldo con malonato.

El caldo con malonato se emplea para diferenciar enterobacterias del grupo de Enterobacter de bacterias del grupo de Escherichia; los primeros son capaces de utilizar malonato como única fuente de carbono, produciendo una reacción alcalina y cambio de color del medio al azul. Si no se aprecia viraje de color la reacción es negativa.